? ? ? ? 每個檢驗實(shí)驗室都應(yīng)當(dāng)對自己做出的樣品檢測結(jié)果負(fù)責(zé)，如同每個工廠都會對自己生產(chǎn)的產(chǎn)品負(fù)責(zé)。工廠會制定各種質(zhì)控方法和措施去保證產(chǎn)品的各項指標(biāo)和參數(shù)滿足要求，從而確保產(chǎn)品的品質(zhì)。實(shí)驗室自然也會制定各種質(zhì)量監(jiān)控方法去保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確和可靠。

圖A.1 實(shí)驗室質(zhì)量監(jiān)控流程圖

? ? ? ?上圖為實(shí)驗室質(zhì)量監(jiān)控的流程圖，出自RB/T 038-2020 《食品微生物檢測結(jié)果質(zhì)量監(jiān)控指南》的附錄A，流程圖中涉及的環(huán)節(jié)很多，受篇幅限制，本文重點(diǎn)介紹其中的一個核心環(huán)節(jié)，即評價依據(jù)，包括流程圖中的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析和結(jié)果評價。

對于內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控方案應(yīng)預(yù)先設(shè)定評價依據(jù)，不同評價依據(jù)對應(yīng)不同的測試統(tǒng)計量，并應(yīng)與所策劃的質(zhì)量監(jiān)控方式對應(yīng)。實(shí)驗室可自行設(shè)定評價依據(jù)，包括但不限于：

a)監(jiān)控結(jié)果與添加目標(biāo)微生物的一致性；

b)方法中規(guī)定或?qū)嶒炇彝ㄟ^方法驗證所獲得的質(zhì)量指標(biāo)(如重復(fù)性限、再現(xiàn)性限、回收率等);

c)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如有證標(biāo)準(zhǔn)菌株)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如標(biāo)準(zhǔn)菌株)或質(zhì)控樣品的特征值；

d)控制圖的警示限和控制限;

e)公認(rèn)值，如同一操作者對同一平板重復(fù)計數(shù)，其差異應(yīng)在5%之內(nèi)，不同操作者對同一平板重復(fù)計數(shù)，其差異應(yīng)在10%之內(nèi)；

f)實(shí)驗室內(nèi)部的經(jīng)驗值。

以上是常用的評價依據(jù)，除了f項的經(jīng)驗值外，我們將逐條給大家介紹。

a)監(jiān)控結(jié)果與添加目標(biāo)微生物的一致性

本項適合于定性檢測項目的質(zhì)量監(jiān)控。通常直接將監(jiān)控結(jié)果與指定值進(jìn)行比較，兩者一致視為“滿意”或“正確”，不一致則視為“不滿意”或“不正確”。比如某實(shí)驗室計劃開展沙門氏菌項目的質(zhì)量監(jiān)控，在一個經(jīng)檢驗無沙門氏菌的樣品中人工添加了一定量沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌，混勻后使樣品中沙門氏菌含量在10-100CFU/25g。將此自制質(zhì)控樣品讓實(shí)驗室進(jìn)行檢驗，此自制質(zhì)控樣品的指定值就是陽性，如果實(shí)驗室檢驗后報告結(jié)果為陽性，那么監(jiān)控結(jié)果與指定值一致，視為“滿意”或“正確”；如果實(shí)驗室檢驗后報告結(jié)果為陰性，那么監(jiān)控結(jié)果與指定值不一致，視為“不滿意”或“不正確”。定性檢測項目的評價方式是很直接的，一般不涉及統(tǒng)計量。詳見RB/T 038-2020的7.2.1條。

e)公認(rèn)值，如同一操作者對同一平板重復(fù)計數(shù)，其差異應(yīng)在5%之內(nèi)，不同操作者對同一平板重復(fù)計數(shù)，其差異應(yīng)在10%之內(nèi)；

公認(rèn)值可以理解為一種行業(yè)內(nèi)的默認(rèn)值。條款中的舉例是針對定量項目檢驗流程中平板計數(shù)這一個步驟的監(jiān)控。5%和10%就是公認(rèn)值，此方法可用于內(nèi)部人員比對監(jiān)控方式的評價。

評價依據(jù)的a和e兩項都比較簡單，我們下面重點(diǎn)介紹b，c，d三項。此三項都用于定量檢測項目。

b)方法中規(guī)定或?qū)嶒炇彝ㄟ^方法驗證所獲得的質(zhì)量指標(biāo)(如重復(fù)性限、再現(xiàn)性限、回收率等);

此項是利用標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定的質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計分析和評價。實(shí)際工作中經(jīng)常利用的指標(biāo)有三個，分別是重復(fù)性限（r）、加標(biāo)回收率和置信區(qū)間。在ISO標(biāo)準(zhǔn)體系中，此三個指標(biāo)都明確給出，可以直接利用。但是國標(biāo)體系中重復(fù)性限（r）和加標(biāo)回收兩個指標(biāo)在微生物檢測方法中很少提及，所以可以直接參考ISO標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)或自行通過方法驗證獲得。

b.1)重復(fù)性限（r）

以ISO 4833-1-2013《食品鏈微生物學(xué) 微生物計數(shù)的水平方法 第1部分：30°C傾注平板菌落計數(shù)》為例，此標(biāo)準(zhǔn)提供的指標(biāo)是以生奶或巴氏殺菌奶為基質(zhì)重復(fù)性限（r）為0.25（log₁₀）。重復(fù)性限（r）是指在同一實(shí)驗室，由同一操作人員使用相同的設(shè)備，按相同的測試方法，在短時間內(nèi)對同一被測對象進(jìn)行的兩次獨(dú)立測試結(jié)果對數(shù)值之差不得大于0.25（log₁₀）。也就是說，如果以重復(fù)性限（r）指標(biāo)進(jìn)行菌落總數(shù)的內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控，那么第一次實(shí)驗結(jié)果是1.0×10⁵CFU/g，轉(zhuǎn)log值后為5（log₁₀），根據(jù)重復(fù)性限（r）為0.25（log₁₀）的要求，第二次實(shí)驗結(jié)果應(yīng)該在5±0.25（log₁₀），即4.75-5.25（log₁₀）之間。轉(zhuǎn)換為CFU值就是5.6×10⁴-1.8×10⁵CFU/g之間。如果第二次實(shí)驗的真實(shí)結(jié)果落在此范圍內(nèi)，那么本次內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的結(jié)果為“滿意”。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.1條。

b.2)加標(biāo)回收率

此指標(biāo)在微生物檢測標(biāo)準(zhǔn)中涉及很少，目前只有ISO 9308-1-2014《水質(zhì)大腸埃希氏菌和大腸菌群計數(shù) 第1部分低背景菌群水的膜過濾法》中有提及，所以本文不再展開詳述。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.2條。

b.3)置信區(qū)間

置信區(qū)間指標(biāo)主要在最可能數(shù)（MPN）計數(shù)法中提及。在再現(xiàn)性條件下，對樣品進(jìn)行分析所得重復(fù)測試結(jié)果，如果試驗組結(jié)果在對照組結(jié)果的95%置信區(qū)間內(nèi)，則可認(rèn)為試驗組結(jié)果與對照組結(jié)果沒有顯著性差異。例如：假設(shè)某一對照組人員按照GB4789.3第一法進(jìn)行大腸菌群測試計數(shù)，陽性管數(shù)為3-2-1，查MPN表得到150 MPN，查MPN表又可知其95%置信區(qū)間的上限為420 MPN,下限為37 MPN，那么另一試驗組人員檢測結(jié)果所得MPN值在37~420之間，均可認(rèn)為試驗組人員的測試結(jié)果與對照組人員的測試結(jié)果沒有顯著性差異。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.3條。

c)有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如有證標(biāo)準(zhǔn)菌株)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如標(biāo)準(zhǔn)菌株)或質(zhì)控樣品的特征值；

此項是利用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如有證標(biāo)準(zhǔn)菌株)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品(如標(biāo)準(zhǔn)菌株)或質(zhì)控樣品的特征值來進(jìn)行統(tǒng)計分析和評價。其中最推薦的是質(zhì)控樣品。目前國內(nèi)常見質(zhì)控樣品都會提供特性值和特性值區(qū)間。以中國檢科院質(zhì)控樣為例，證書上會提供以下參數(shù)，包括特性值、標(biāo)準(zhǔn)差和特性值區(qū)間。

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? ? ? ? 如果用此質(zhì)控樣品進(jìn)行檢測，只要檢測結(jié)果落在特性值區(qū)間內(nèi)，則視為“滿意”。越接近特性值，說明實(shí)驗誤差越小。

質(zhì)控樣品特性值區(qū)間是根據(jù)特性值和標(biāo)準(zhǔn)差，利用區(qū)間估計的公式進(jìn)行計算而得。公式如下：

式中：

CI----置信區(qū)間；

μ0----平均菌落數(shù)；

S----標(biāo)準(zhǔn)差；

k----包含因子。

? 以上述截圖的質(zhì)控樣證書為例：大腸埃希氏菌質(zhì)控樣的平均菌落數(shù)，也就是特性值為3.022（log₁₀CFU/mL）,對應(yīng)菌落數(shù)為1051 CFU/mL，修約后為1100 CFU/mL，標(biāo)準(zhǔn)差為0.483（log₁₀CFU/mL），此數(shù)值應(yīng)該是由log值計算出，所以沒有轉(zhuǎn)換回菌落數(shù)的意義。那么CI=3.022±k×0.483。當(dāng)k=1時，表示所有測量均值中有68%的值落在2.539 ~3.505（log₁₀CFU/mL）之間；當(dāng)k=2時，表示所有測量均值中有95%的值落在2.056 ~3.988（log_10?CFU/mL）之間，當(dāng)k=3時，表示所有測量均值中有99.7%的值落在1.573~4.471（log_10?CFU/mL）之間。本質(zhì)控樣品選用了k=2, 所有測量均值有95%的值落在2.056 ~3.988（log_10?CFU/mL）之間，即菌落數(shù)為110-9700 CFU/mL。這就是特性值區(qū)間的意義。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.4條。

如果質(zhì)控樣品可以提供擴(kuò)展測量不確定度，并且檢驗實(shí)驗室自身已經(jīng)計算過自己實(shí)驗室該項目的擴(kuò)展測量不確定度，則可以利用此類質(zhì)控樣品的信息進(jìn)行評價。統(tǒng)計量為E_n值。|E_n|≤1，表明測量結(jié)果的質(zhì)量得到保證，無需采取進(jìn)一步措施；|E_n|>1，表明測量結(jié)果的質(zhì)量失控，宜查找原因并迅速采取糾正措施。由于此統(tǒng)計量使用較少，本文不再展開介紹公式和計算過程。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.5條。

目前在國內(nèi)檢測行業(yè)中將質(zhì)控樣品直接用于內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的情況最為常見，一般質(zhì)控樣品也直接提供特性值和特性值區(qū)間，無需檢測實(shí)驗室自行計算置信區(qū)間。所以檢測實(shí)驗室直接購買質(zhì)控樣品是最省時省力的內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控方式。

d)控制圖的警示限和控制限;

d項是利用控制圖進(jìn)行統(tǒng)計分析及評價。在室內(nèi)再現(xiàn)性條件下，食品微生物檢測數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布時，可使用控制圖進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。以代表時間或順序抽取的樣品號為橫坐標(biāo)，以代表質(zhì)量水平的特征值為縱坐標(biāo)，繪制控制圖。通常使用單值-移動極差控制圖(X-R_m控制圖)監(jiān)控菌落計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密度，也可用于監(jiān)控MPN法計數(shù)結(jié)果。構(gòu)建單值-移動極差控制圖(X-R_m控制圖)時原則上需要20個以上測試數(shù)據(jù)。宜在日常檢測過程中檢測相應(yīng)的質(zhì)量監(jiān)控樣品。將質(zhì)控數(shù)據(jù)處理后，按時間順序繪制在建立好的控制圖上。下列任何一種情況是不能接受的，過程可能失控：

a)一個或多個連續(xù)值超出“控制限”;

b)連續(xù)3次觀察中有兩次超過同一“警示限”;

c)連續(xù)9次觀測值在平均值的同一側(cè)；

d)連續(xù)6次觀測值穩(wěn)步上升或下降。

一旦識別出失控，應(yīng)立即進(jìn)行不符合調(diào)查，采取適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險應(yīng)對措施。

控制圖適合連續(xù)監(jiān)控，平時使用較少，本文不再展開計算過程，僅展示某次實(shí)驗的X-R_m控制圖供大家參考。詳見RB/T 038-2020的7.2.2.7條。

以上就是本文給大家介紹的幾種內(nèi)部質(zhì)量監(jiān)控的評價依據(jù)，其中a項適合定性項目，e項比較簡單直觀。b、c、d三項是用于定量項目監(jiān)控比較多的評價依據(jù)，其中b和c項又各自有幾種不同的評價依據(jù)，各位檢測行業(yè)的老師可以根據(jù)自己實(shí)驗室的實(shí)際情況進(jìn)行選擇。一般情況下，選擇市售合格的質(zhì)控樣品，直接參考證書給出的特性值和特性值范圍進(jìn)行評價是最簡單的辦法。

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參考文獻(xiàn)：

1、RB/T 038-2020 食品微生物檢測結(jié)果質(zhì)量監(jiān)控指南

2、ISO 4833-1-2013食品鏈微生物學(xué) 微生物計數(shù)的水平方法 第1部分：30°C傾注平板菌落計數(shù)